RNAclean Kit

ሀ -1 የሕዋስ ምርመራ ወይም ግብረ ሰዶማዊነት በቂ አይደለም

---- የናሙና አጠቃቀምን ይቀንሱ ፣ የሊሲስ ቋት መጠንን ይጨምሩ ፣ ግብረ ሰዶማዊነትን እና የሊሲስ ጊዜን ይጨምሩ።

A-2 የናሙና መጠን በጣም ትልቅ ነው

---- ያገለገለውን የናሙና መጠን ይቀንሱ ወይም የሊሲስ ቋት መጠን ይጨምሩ።

ሀ -1 በቂ ያልሆነ የሕዋስ ምርመራ ወይም ግብረ ሰዶማዊነት

---- የናሙና አጠቃቀምን ይቀንሱ ፣ የሊሲስ ቋት መጠንን ይጨምሩ ፣ ግብረ ሰዶማዊነትን እና የሊሲስ ጊዜን ይጨምሩ።

A-2 የናሙና መጠን በጣም ትልቅ ነው

---- እባክዎን ከፍተኛውን የማቀነባበሪያ አቅም ይመልከቱ።

A-3 አር ኤን ኤ ከአምዱ ሙሉ በሙሉ አልተመረጠም

---- RNase-Free ውሃ ከጨመሩ በኋላ ፣ ከማዕከሉ በፊት ለጥቂት ደቂቃዎች ይተዉት።

ኤ -4 ኤታኖል በከፍተኛ ሁኔታ

---- ከታጠበ በኋላ እንደገና ሴንትሪፈሪ ያድርጉ እና በተቻለ መጠን የልብስ ማጠቢያ መያዣውን ያስወግዱ።

A-5 የሕዋስ ባህል መካከለኛ ሙሉ በሙሉ አልተወገደም

---- ሴሎችን በሚሰበስቡበት ጊዜ እባክዎን በተቻለ መጠን የባህሉን መካከለኛ ማስወገድዎን ያረጋግጡ።

ሀ -6 በ አር ኤን ኤስ መደብር ውስጥ የተከማቹ ሕዋሳት ውጤታማ በሆነ ሁኔታ ማዕከላዊ አይደሉም

---- አር ኤን ኤ መደብር ጥግግት ከአማካይ የሕዋስ ባህል መካከለኛ ይበልጣል። ስለዚህ የሴንትሪፉጋል ኃይል መጨመር አለበት። በ 3000x ግ ወደ ሴንትሪፍተር ለመጠቆም ይመከራል።

ናሙና-ኤ -7 ዝቅተኛ አር ኤን ኤ ይዘት እና ብዛት

---- ዝቅተኛ ምርቱ በናሙናው የተከሰተ መሆኑን ለመወሰን አዎንታዊ ናሙና ይጠቀሙ።

ሀ -1 ቁሱ ትኩስ አይደለም

---- ትኩስ ሕብረ ሕዋሳት የማውጣት ውጤቱን ለማረጋገጥ ወዲያውኑ በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ መቀመጥ ወይም ወዲያውኑ ወደ አር ኤን ኤ ሬስቶራንት ውስጥ ማስገባት አለባቸው።

A-2 የናሙና መጠን በጣም ትልቅ ነው

---- የናሙና መጠንን ይቀንሱ።

ኤ -3 RNase ብክለትn

---- ኪት ውስጥ የቀረበው ቋት RNase ባይኖረውም ፣ በማውጣት ሂደት ወቅት RNase ን መበከል ቀላል ስለሆነ በጥንቃቄ መያዝ አለበት።

ኤ -4 ኤሌክትሮፊሮሲስ ብክለት

---- የኤሌክትሮፊሶሪስ ቋት ይተኩ እና የፍጆታ ዕቃዎች እና የመጫኛ ቋት ከ RNase ብክለት ነፃ መሆናቸውን ያረጋግጡ።

ሀ -5 ለኤሌክትሮፊፎረስ በጣም ብዙ ጭነት

---- የናሙና ጭነት መጠንን ይቀንሱ ፣ የእያንዳንዱ ጉድጓድ ጭነት ከ 2 μ ግ መብለጥ የለበትም።

A-1 የናሙና መጠን በጣም ትልቅ ነው

---- የናሙና መጠንን ይቀንሱ።

ሀ -2 አንዳንድ ናሙናዎች ከፍተኛ የዲ ኤን ኤ ይዘት አላቸው እና በ DNase ሊታከሙ ይችላሉ።

---- የ RNase-Free DNase ሕክምናን በተገኘው አር ኤን ኤ መፍትሄ ላይ ያከናውኑ ፣ እና አር ኤን ኤ ከህክምናው በኋላ ለቀጣይ ሙከራዎች በቀጥታ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል ፣ ወይም በ RNA የመንጻት ኪትቶች የበለጠ ሊጸዳ ይችላል።

ለብርጭቆ ዕቃዎች ፣ በ 4 ሰዓት በ 150 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ የተጋገረ። ለፕላስቲክ ኮንቴይነሮች ፣ በ 0.5 M NaOH ውስጥ ለ 10 ደቂቃዎች ተጠምቀዋል ፣ ከዚያ ከ RNase-free ውሃ ጋር በደንብ ይታጠቡ እና ከዚያ አርኤንኤስን ሙሉ በሙሉ ለማስወገድ ያሽጡ። በሙከራው ውስጥ ጥቅም ላይ የዋሉት reagents ወይም መፍትሄዎች ፣ በተለይም ውሃ ፣ ከ RNase ነፃ መሆን አለባቸው። ለሁሉም የ reagent ዝግጅቶች ከ RNase ነፃ ውሃ ይጠቀሙ (ውሃ ወደ ንፁህ የመስታወት ጠርሙስ ይጨምሩ ፣ DEPC ን ወደ 0.1% (V/V) የመጨረሻ ክምችት ይጨምሩ ፣ በአንድ ሌሊት ይንቀጠቀጡ እና በራስ-ሰር ይንቀጠቀጡ)።