የደም ቀጥታ PCR ኪት

ያለማውጣት ደም እንደ አብነት በመጠቀም በቀጥታ የታለመውን ጂን በፍጥነት ማጉላት።

ይህ ኪት በሰው ጂኖም ውስጥ አንድ-ቅጂ ጂኖችን በብቃት ለማሳደግ በጄኔቲክ ምሕንድስና ፀረ-ተከላካይ ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ ይቀበላል። በዚህ ኪት ውስጥ በጥሩ ሁኔታ የተመቻቸ የማቆያ ስርዓት ፖሊሜራዝ የ PCR ማገጃዎችን መከልከልን በጥብቅ እንዲቋቋም ይረዳል ፣ ስለሆነም ደም እና ባህላዊ ህዋሶችን እንደ አብነቶች በመጠቀም ዲ ኤን ኤን በቀጥታ ማጉላት ይችላል። ይህ ምርት ለመሥራት ቀላል እና እንደ ዲ ኤን ኤ መንጻት ወይም የናሙና ቅድመ አያያዝ ያሉ ውስብስብ እርምጃዎችን አይፈልግም።
ይህ ኪት እንደ 2 × MasterMix ተሰጥቷል ፣ እና ምላሹ በቀላሉ የደም አብነት እና ተጓዳኝ የመለየት ጠቋሚዎችን በማከል ሊከናወን ይችላል። እንደ ሰዎች ፣ አይጦች ፣ አሳማዎች ፣ ከብቶች እና ሌሎች ዝርያዎች ፣ እንዲሁም ትኩስ ወይም 4 ℃ cryopreserved ሙሉ ደም ፣ ፀረ -ተሕዋስያን (ኤዲታ ፣ ሲትሬት ፣ ሄፓሪን) ፣ ፈሳሽ የደም ቅንጣቶች እና ደረቅ የደም ነጠብጣቦች ባሉ አጥቢ አጥቢ እንስሳት ሕዋሳት ላይ ሊተገበር ይችላል። በ Whatman 903 እና FTA Elute የንግድ ካርዶች ላይ ተከማችቷል።

ድመት. አይ	የማሸጊያ መጠን
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

ኢሜል ይላኩልን

የምርት ዝርዝር

የሙከራ ምሳሌ

በየጥ

የምርት መለያዎች

ዋና መለያ ጸባያት

■ ቀላል እና ፈጣን - የናሙና ዝግጅት እና የዲ ኤን ኤ ማውጣት አድካሚ ደረጃዎች ሳያስፈልጋቸው የ PCR ማጉላት ደም እንደ አብነት በመጠቀም በቀጥታ ሊከናወን ይችላል።
■ ከፍተኛ ንፅህና-የናሙና ቅድመ-ህክምና እና የዲ ኤን ኤ የማውጣት እርምጃዎች መዝለል የናሙናዎችን መበከል ለማስወገድ ይረዳል።
Through ከፍተኛ ውጤት-ለትላልቅ ናሙናዎች የ PCR መታወቂያ ኪትውን ከ 96/384 ጉድጓድ PCR ሰሌዳዎች ጋር በማጣመር ሊከናወን ይችላል።
■ ጠንካራ ሁለንተናዊነት - ይህ ኪት ከፍተኛ የ GC ቁርጥራጮችን ወይም ውስብስብ ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር ያላቸውን ቁርጥራጮች በብቃት ማጉላት ይችላል ፣ እና የማጉያው ርዝመት እስከ 5 ኪባ ሊደርስ ይችላል።
Stress ጠንካራ የጭንቀት መቋቋም - ይህ ኪት በተለያዩ መንገዶች ለተጠበቁ የተለያዩ ዝርያዎች እና የደም ናሙናዎች ሊተገበር ይችላል።

ማመልከቻዎች

የዚህ ኪት PCR ምርቶች በ 3′-መጨረሻ ላይ “ሀ” ን ይ containsል ፣ ይህም ለ TA ቬክተር ክሎኒንግ በቀጥታ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል። ይህ ኪት ለጄኖሚክ ዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮች ፣ ከፍተኛ ውጤት የዘር ውርስ ትንተና እና ጂኖፒንግ (እንደ ጂን መለየት) ትንታኔን ለማጎልበት ሊያገለግል ይችላል።

ሁሉም ምርቶች ለ ODM/OEM ሊበጁ ይችላሉ። ለዝርዝሮች ፣እባክዎን ብጁ አገልግሎት (ኦዲኤም/ኦሪጂናል ዕቃ አምራች) ላይ ጠቅ ያድርጉ

ቀዳሚ ፦ TIANcombi ዲ ኤን ኤ ሊሴ እና ዲት ፒሲአር ኪት

ቀጣይ ፦ የመዳፊት ቲሹ ቀጥተኛ PCR ኪት

	የሰው EDTA ፀረ -ተውሳክነትን እንደ አብነት በመጠቀም ፣ የተለያዩ የጂ.ሲ ይዘቶች ያላቸው 4 ጂኖች በደም ቀጥታ PCR ኪት ተጨምረዋል። የ PCR ምላሽ ስርዓት 20 μl ነበር ፣ እና 1 μl ደም እንደ አብነት ጥቅም ላይ ውሏል። መ: TIANGEN አመልካች II; 1: ቁርጥራጭ መጠን 1090 ቢፒ ፣ የጂሲ ይዘት 68.1%; 2: ቁርጥራጭ መጠን 1915 bp ፣ የጂሲ ይዘት 70.4%; 3: ቁርጥራጭ መጠን 448 ቢፒ ፣ የጂሲ ይዘት 74.8%; 4: ቁርጥራጭ መጠን 1527 ቢፒ ፣ የጂሲ ይዘት 61.5%። የሙከራ ውጤቶች-የደም ቀጥታ PCR ኪት ከጂ.ሲ.ሲ ይዘት ጋር የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮችን ከ 61.5%-74.8%ባለው ክልል ውስጥ በከፍተኛ ሁኔታ ማጉላት ይችላል ፣ ይህም ከፍተኛ-ጂሲ ቁርጥራጮችን ማጉላት የሚችል መሆኑን ይጠቁማል።
	የሰው EDTA ፀረ -ተውሳክነትን እንደ አብነት በመጠቀም ፣ የተለያየ ርዝመት ያላቸው 5 ጂኖች (ActB ፣ Prp ፣ DN1.0 ፣ Hn2.0 እና Hn4.0) በደም ቀጥተኛ PCR ኪት ተጨምረዋል። የ PCR ምላሽ ስርዓት 20 μl ነበር ፣ እና 1 μl ደም እንደ አብነት ጥቅም ላይ ውሏል። መ: TIANGEN አመልካች II; 1-3: 3 የተለያዩ የደም ናሙናዎች; NTC: ያለ ፕሪሚየር ቁጥጥር። የሙከራ ውጤቶች -ደም ቀጥታ PCR Kit እስከ 4 ኪባ ድረስ ቁርጥራጮችን ማጉላት ይችላል ፣ ይህም ረጅም ቁርጥራጮችን ማጉላት የሚችል መሆኑን ይጠቁማል።
	የሰው EDTA ፀረ -ተውሳሽነትን እንደ አብነት በመጠቀም ፣ ደም ቀጥታ PCR ኪት ለ PCR የተለያዩ የደም ናሙናዎችን ለመለየት ጥቅም ላይ ውሏል። የ PCR ምላሽ ስርዓት 20 μl ነበር ፣ እና 1 μl ደም እንደ አብነት ጥቅም ላይ ውሏል። መ: TIANGEN አመልካች II; 1-9: የደም ጭነት መጠን 0.1 μl ፣ 0.2 μl ፣ 0.3 μl ፣ 0.4 μl ፣ 1 μl ፣ 2 μl ፣ 3 μl ፣ 4 μl እና 5 μl ፣ NTC: ያለ አብነት ይቆጣጠሩ የሙከራ ውጤቶች-የደም ቀጥታ PCR ኪት ለደም ጠንካራ የመቋቋም ችሎታ ያለው እና ከ 0.1-5 μl የመጫኛ ክልል ጋር የደም ናሙናዎችን ማጉላት ይችላል።
	ከሰው ፣ ከአይጥ ፣ ከዶሮ እና ከተለያዩ ህክምናዎች የተውጣጡ ሌሎች የደም ናሙናዎች እንደ አብነት ያገለግሉ ነበር። የደም ቀጥታ PCR ኪት PRNP (የሰው ልጅ ፣ 750 ቢፒ) ፣ አክቲን (አይጥ ፣ 200 ቢፒ) እና β-አክቲን (ዶሮ ፣ 1.0 ኪባ) ለማጉላት ጥቅም ላይ ውሏል። የ PCR ምላሽ ስርዓት 20 μl ነበር ፣ እና 1 μl ደም እንደ አብነት ጥቅም ላይ ውሏል። መ: TIANGEN ማርከር II። የሙከራ ውጤቶች - የደም ቀጥታ PCR ኪት በተለያዩ ናሙናዎች ላይ ሊተገበር ይችላል ፣ እና የቀጥታ PCR መለየት ከተለያዩ ህክምናዎች ከተለያዩ ዝርያዎች የደም ናሙናዎች ላይ ሊከናወን ይችላል።

ጥ: የማጉላት ባንዶች የሉም

ሀ -1 አብነት

Template አብነቱ የፕሮቲን ቆሻሻዎችን ወይም የታክ ማገጃዎችን ፣ ወዘተ ይ containsል ——— የዲ ኤን ኤ አብነት ያፅዱ ፣ የፕሮቲን ብክለቶችን ያስወግዱ ወይም አብነት ዲ ኤን ኤን በማጣራት ኪት ያወጡ።

Of የአብነት ማካካሻ አልተጠናቀቀም ———የዲፕሬቲቭ የሙቀት መጠንን ይጨምሩ እና የደንብ ጊዜን ያራዝሙ።

■ የአብነት መበላሸት —— አብነቱን እንደገና ያዘጋጁ።

ሀ -2 ፕሪመር

Of ዝቅተኛ ጥራት ያላቸው ጠቋሚዎች —— ፕሪመርን እንደገና ማቀነባበር።

■ ፕሪሚየር ማሽቆልቆል —— ከፍተኛ ጥበቃን ለማከማቸት በትንሽ መጠን ውስጥ ይቅረጹ። ብዙ ማቀዝቀዝ እና ማቅለጥን ወይም የረጅም ጊዜ 4 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ጠብቆ ማቆየትን ያስወግዱ።

Prime ተገቢ ያልሆነ የቅድመ -ንድፍ (ለምሳሌ የመጀመርያ ርዝመት በቂ አይደለም ፣ በዲሚየር መካከል የተፈጠረ ዲሜር ፣ ወዘተ) -ፕሪሚየር አርማዎችን (ፕሪመር ዲሜር እና ሁለተኛ መዋቅር ከመፍጠር ይቆጠቡ)

ኤ -3 ሚ²⁺ትኩረት

■ ኤም²⁺ ትኩረቱ በጣም ዝቅተኛ ነው ——በመጠን Mg ይጨምሩ²⁺ማጎሪያ -ኤምጂውን ያሻሽሉ²⁺ ጥሩውን Mg ለመወሰን ከ 1 ሚሜ እስከ 3 ሚሜ በተከታታይ ምላሾች ማጎሪያ በ 0.5 ሚሜ መካከል²⁺ ለእያንዳንዱ አብነት እና ፕሪመር ትኩረት።

ሀ -4 የማቅለጫ ሙቀት

High ከፍ ያለ የማብሰያው ሙቀት በፕሪመር እና በአብነት ትስስር ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል። —— የማቅለጫውን የሙቀት መጠን ይቀንሱ እና ሁኔታውን በ 2 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ደረጃ ያሻሽሉ።

ሀ -5 የኤክስቴንሽን ጊዜ

■ አጭር የማራዘሚያ ጊዜ —— የቅጥያ ጊዜን ይጨምሩ።

ጥያቄ - ሐሰተኛ አዎንታዊ

ፍኖሜና - አሉታዊ ናሙናዎች እንዲሁ የዒላማውን ተከታታይ ባንዶች ያሳያሉ።

ሀ -1 የ PCR መበከል

Target የዒላማ ቅደም ተከተል ወይም የማጉላት ምርቶች ተሻጋሪ መበከል —— —እንዲሁም የዒላማውን ቅደም ተከተል የያዘውን ናሙና በአሉታዊው ናሙና ውስጥ ላለማፍሰስ ወይም ከማዕከላዊው ቱቦ ውስጥ እንዳያፈሱ። የ reagents ወይም መሣሪያዎች ነባር ኑክሊክ አሲዶችን ለማስወገድ አውቶሞቢል መሆን አለባቸው ፣ እና የብክለት መኖር በአሉታዊ ቁጥጥር ሙከራዎች መወሰን አለበት።

■ የ reagent ብክለት —— reagents ን ያጥፉ እና በዝቅተኛ የሙቀት መጠን ያከማቹ።

ሀ -2 ፕራይምr

■ ኤም²⁺ ትኩረቱ በጣም ዝቅተኛ ነው ——በመጠን Mg ይጨምሩ²⁺ ማጎሪያ -ኤምጂውን ያሻሽሉ²⁺ ጥሩውን Mg ለመወሰን ከ 1 ሚሜ እስከ 3 ሚሜ በተከታታይ ምላሾች ማጎሪያ በ 0.5 ሚሜ መካከል²⁺ ለእያንዳንዱ አብነት እና ፕሪመር ትኩረት።

Per ተገቢ ያልሆነ የመጀመሪያ ደረጃ ንድፍ ፣ እና የዒላማው ቅደም ተከተል ኢላማ ካልሆነ ቅደም ተከተል ጋር ተመሳሳይነት አለው። —— እንደገና ንድፍ አውጪዎች።

ጥ-ልዩ ያልሆነ ማጉላት

Phenomena: የ PCR ማጉያ ባንዶች ከሚጠበቀው መጠን ጋር ይጣጣማሉ ፣ ትልቅም ይሁን ትንሽ ፣ ወይም አንዳንድ ጊዜ ሁለቱም የተወሰኑ የማጉያ ባንዶች እና ልዩ ያልሆኑ የማጉያ ባንዶች ይከሰታሉ።

ሀ -1 ቀዳሚ

■ ደካማ የመጀመሪያ ደረጃ ልዩነት

—— የሪ-ንድፍ ፕሪመር።

Prim የመጀመሪያ ደረጃ ትኩረቱ በጣም ከፍተኛ ነው ——የዲፕሬቲቭ የሙቀት መጠንን በትክክል ይጨምሩ እና የዴንቴሽን ጊዜን ያራዝሙ።

ሀ -2 ሚ²⁺ ትኩረት

M ኤም²⁺ ማጎሪያ በጣም ከፍተኛ ነው ——— የ Mg2+ ትኩረትን በደንብ ይቀንሱ -ኤምጂውን ያሻሽሉ²⁺ ጥሩውን Mg ለመወሰን ከ 1 ሚሜ እስከ 3 ሚሜ በተከታታይ ምላሾች ማጎሪያ በ 0.5 ሚሜ መካከል²⁺ ለእያንዳንዱ አብነት እና ፕሪመር ትኩረት።

A-3 Thermostable polymerase

En ከመጠን በላይ የኢንዛይም መጠን —— በ 0.5 ዩ መካከል የኢንዛይም መጠንን በተገቢው ሁኔታ ይቀንሱ።

ሀ -4 የማቅለጫ ሙቀት

An የማቅለጫው የሙቀት መጠን በጣም ዝቅተኛ ነው ——የመቀየሪያውን የሙቀት መጠን በትክክል ይጨምሩ ወይም ባለ ሁለት-ደረጃ የማቅለጫ ዘዴን ይቀበሉ

A-5 PCR ዑደቶች

PC በጣም ብዙ የ PCR ዑደቶች —— የ PCR ዑደቶችን ቁጥር ይቀንሱ።

ጥ: ተጣጣፊ ወይም ስሚር ባንዶች

ሀ -1 ቀዳሚ——የደሃነት ልዩነት —— ፕሪሚየርን እንደገና ዲዛይን ያድርጉ ፣ ልዩነቱን ለማሳደግ የመቀየሪያውን አቀማመጥ እና ርዝመት ይለውጡ ፣ ወይም ጎጆ ያለው PCR ያከናውኑ።

ኤ -2 አብነት ዲ ኤን ኤ

—— አብነቱ ንፁህ አይደለም —— አብነቱን ያፅዱ ወይም ዲ ኤን ኤን በማጣራት ኪት ያወጡ።

ኤ -3 ሚ²⁺ ትኩረት

—— mg²⁺ ትኩረቱ በጣም ከፍ ያለ ነው ——ግ Mg ን በደንብ ይቀንሱ²⁺ ማጎሪያ -ኤምጂውን ያሻሽሉ²⁺ ጥሩውን Mg ለመወሰን ከ 1 ሚሜ እስከ 3 ሚሜ በተከታታይ ምላሾች ማጎሪያ በ 0.5 ሚሜ መካከል²⁺ ለእያንዳንዱ አብነት እና ፕሪመር ትኩረት።

A-4 dNTP

—— የዲኤንቲፒዎች ትኩረት በጣም ከፍተኛ ነው—— የዲኤንቲፒ ትኩረትን በአግባቡ ይቀንሱ

ሀ -5 የማቅለጫ ሙቀት

—— በጣም ዝቅተኛ የአናኒንግ ሙቀት ——የመጠለያውን የሙቀት መጠን በትክክል ይጨምሩ

ሀ -6 ዑደቶች

—— ብዙ ዑደቶች —— የዑደት ቁጥሩን ያሻሽሉ

ጥ: በ 50 μl PCR ምላሽ ስርዓት ውስጥ ምን ያህል አብነት ዲ ኤን ኤ መጨመር አለበት?

ጥ: - ረጅም ቁርጥራጮችን እንዴት ማጉላት?

የመጀመሪያው እርምጃ ተገቢውን ፖሊመርዜሽን መምረጥ ነው። በ 3'-5 'exonuclease እንቅስቃሴ እጥረት ምክንያት መደበኛ Taq ፖሊሜሬዝ እንደገና ማንበብ አይችልም ፣ እና አለመመጣጠን ቁርጥራጮች የቅጥያ ቅልጥፍናን በእጅጉ ይቀንሳል። ስለዚህ ፣ መደበኛ ታክ ፖሊሜሬዝ ከ 5 ኪ.ባ የሚበልጡ የዒላማ ቁርጥራጮችን በብቃት ማጉላት አይችልም። Taq polymerase በልዩ ማሻሻያ ወይም በሌላ ከፍተኛ ታማኝነት ፖሊሜሬዝ የቅጥያ ቅልጥፍናን ለማሻሻል እና የረጅም ቁርጥራጭ ማጉያ ፍላጎቶችን ለማሟላት መመረጥ አለበት። በተጨማሪም ፣ ረጅም ቁርጥራጮች ማጉላት እንዲሁ የቅድመ-ንድፍ ዲዛይን ፣ የዲታቴሽን ጊዜ ፣ የኤክስቴንሽን ጊዜ ፣ ቋት ፒኤች ፣ ወዘተ ተጓዳኝ ማስተካከያ ይጠይቃል። የአብነት ጉዳትን ለመከላከል ፣ በ 94 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ላይ ያለው የዴታቴሽን ጊዜ በአንድ ዑደት ወደ 30 ሰከንድ ወይም ከዚያ በታች መቀነስ አለበት ፣ እና ከማጉላቱ በፊት ወደ 94 ° ሴ የሙቀት መጠን ከፍ ለማድረግ ጊዜው ከ 1 ደቂቃ ያነሰ መሆን አለበት። በተጨማሪም ፣ የቅጥያውን የሙቀት መጠን በ 68 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ገደማ ማዘጋጀት እና በ 1 ኪቢ/ደቂቃ መጠን መሠረት የኤክስቴንሽን ጊዜን ዲዛይን ማድረጉ የረጅም ቁርጥራጮችን ውጤታማ ማጉላት ያረጋግጣል።

ጥ: - የ PCR ማጉላት ታማኝነትን እንዴት ማሻሻል ይቻላል?

በከፍተኛ ታማኝነት የተለያዩ የዲ ኤን ኤ ፖሊሜረሎችን በመጠቀም የ PCR ማጉላት የስህተት መጠን ሊቀንስ ይችላል። እስካሁን ከተገኙት ሁሉም የታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊሜረሎች መካከል ፣ የፉፉ ኢንዛይም ዝቅተኛው የስህተት መጠን እና ከፍተኛ ታማኝነት አለው (የተያያዘውን ሰንጠረዥ ይመልከቱ)። ከኤንዛይም ምርጫ በተጨማሪ ፣ ተመራማሪዎች የመጠባበቂያ ቅንጅትን ማሻሻል ፣ የሙቀት መቆጣጠሪያ ፖሊመሬስን ትኩረት እና የ PCR ዑደት ቁጥርን ማሻሻል ጨምሮ የምላሽ ሁኔታዎችን በማሻሻል የ PCR ሚውቴሽን መጠንን የበለጠ ሊቀንሱ ይችላሉ።

መልእክትዎን እዚህ ይፃፉ እና ለእኛ ይላኩልን